影響ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的因素
一、試劑盒
1、抗原、抗體活性對(duì)效價(jià)的影響：主要是試劑中抗體(或抗原)的效價(jià)降低或失活，結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對(duì)雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高，實(shí)驗(yàn)中空白對(duì)照OD值偏高或假陽性;
2、酶結(jié)合物濃度過高，也會(huì)導(dǎo)致OD值假性增高。
二、試驗(yàn)儀器
1、ELISA試劑盒加樣器是否經(jīng)過校正，酶免測(cè)定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不，會(huì)使結(jié)果忽高忽低;
2、每次洗板前，應(yīng)檢查洗板機(jī)針孔有無堵塞。
三、操作
1、檢測(cè)前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時(shí)放回冰箱冷藏，以免造成試驗(yàn)結(jié)果假性降低;
2、加樣時(shí)注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性;
3、洗滌不充分，會(huì)使結(jié)果假性增高，過分洗滌呈假陰性;
4、比色時(shí)應(yīng)保持包被孔底部無異物、無水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時(shí)，底部留有水汽，應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色，水汽或孔內(nèi)氣泡也會(huì)使OD值升高;
5、抗原與抗體反應(yīng)達(dá)到完全平衡，依賴于溫度與時(shí)間。溫度45℃易引起失活及標(biāo)記物脫落，溫度低于4℃，影響反應(yīng)速度。

ELISA試劑盒保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時(shí)可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA試劑盒應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性良好的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如此。
為什么ELISA反響總是需求一定時(shí)刻的溫育?
ELISA屬固相測(cè)定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生，以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī)，只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸，這是一個(gè)逐步平衡的進(jìn)程，因而需經(jīng)擴(kuò)散才能到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。
37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度，在建立ELISA方法作反響動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1～2小時(shí)，產(chǎn)品的生成可達(dá)高峰。為加快反響，可進(jìn)步反響的溫度，有些實(shí)驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為，在放射測(cè)定中多使反響在冰箱中過夜，以構(gòu)成多的沉淀。但因所需時(shí)刻太長，在ELISA試劑盒中一般不予選用。

ELISA檢測(cè)方法的三大特點(diǎn)表現(xiàn)：
1. 穩(wěn)定性好：包被的抗原的穩(wěn)定性可使試劑盒的效期得到，早期以合成肽為包被抗原的試劑盒效期只有3-4個(gè)月，采用基因工程抗原后效期大大延長了。
2. 基因工程抗原將特異性抗原決定簇基因融合表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物包含更多的抗原決定簇，可提高試劑盒的靈敏度，提高檢出率。
3. 分子量大：合成肽采用化學(xué)方法制備，由于工藝的局限，合成數(shù)量有限，只能達(dá)到數(shù)百個(gè)氨基酸。而利用基因工程制備的抗原，分子量更大。
ELISA標(biāo)本之腦血漿的稀釋：
1. 用EDTA2K離心收集在真空血液收集管中的血液，5,000×g，15分鐘，4℃，分離血漿樣品，然后儲(chǔ)存在零下80℃直到使用。
2. 用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液5倍稀釋血漿以避免血漿中的干擾物質(zhì)影響檢測(cè)，按照說明書方法檢測(cè)。

主營產(chǎn)品: 實(shí)驗(yàn)室耗材,pcr耗材,elisa試劑盒,吸頭

本生(天津)健康科技有限公司是一家從事健康科技技術(shù)開發(fā)銷售的公司，公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)。 本生(天津)健康科技有限公司由具有行業(yè)背景和豐富市場(chǎng)經(jīng)驗(yàn)的業(yè)人士組成，于為生命科學(xué)研究域提供產(chǎn)品，為廣大科研工作者提供服務(wù)。 既能滿足研發(fā)類客戶對(duì)產(chǎn)品種類、包裝的特殊要求，也能滿足生產(chǎn)型企業(yè)從小試、中試到規(guī)?；a(chǎn)各個(gè)階段的綜合需求。 產(chǎn)品涵蓋有熒光定量PCR耗材（八聯(lián)管,單管,96孔板,384孔板,封板膜,輔助器等），ELISA試劑盒，移液器吸嘴，離心管，凍存管，培養(yǎng)皿，培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶，吸頭，儀器及手套，培養(yǎng)基，抗體，血清，色譜耗材，針頭過濾器及實(shí)驗(yàn)室常用耗材。 品種類超過萬種，廣泛應(yīng)用于科研院校、中心實(shí)驗(yàn)室、分子生物學(xué)等科研域。 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

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